Với cách nhân giống này sẽ cho ra sản phẩm cây giống đồng đều, khỏe mạnh, số lượng lớn, tiết kiệm thời gian, chi phí. Quy trình nhân giống cây Dã yên thảo bằng phương pháp nuôi cấy mô gồm các bước sau:
1. Chọn cây lấy mẫu
Chọn lọc cây mẹ đầu dòng là một trong những bước quan trọng đảm bảo chất lượng cây con sau này. Vì vậy, cây lấy mẫu phải khỏe mạnh, sinh trưởng và phát triển tốt, đang trong giai đoạn đầu cho hoa.
2. Vô trùng mẫu cấy
Vật liệu được sử dụng để nhân giống là đế hoa. Đế hoa được cắt nhỏ gọn có chiều dài 1cm, mẫu cấy có kích thước 1,5×1,5x10cm. Đế hoa được ngâm trong cồn 70 độ 1 phút sau đó rửa bằng nước cất vô trùng 3 lần rồi đem khử trùng bằng Javel có nồng độ 33% thời gian 15 phút, sau đó rửa lại bằng nước cất vô trùng 3 lần. Sau khi mẫu được vô trùng ta chuyển mẫu ra đĩa cấy đã được vô trùng tiến hành cắt bỏ phần mẫu chết, hủy đỉnh và cấy vào bình có chứa môi trường MS. Sau đó tiếp tục theo dõi mẫu cấy, chọn mẫu còn sống và vô trùng chuyển sang môi trường có chứa chất kích thích sinh trưởng để tiến hành tạo cụm chồi.
3. Tạo cụm chồi
Mẫu cấy vô trùng sau khi được chuyển qua môi trường nuôi cấy MS có chứa BA 2mg/l kết hợp NAA 0,1mg/l sau 30 ngày nuôi cấy hình thành cụm chôi. Kế tiếp các cụm chồi được tách riêng rẽ từng chồi một, có các chồi được cắt thành từng đoạn 1cm và cấy vào môi trường tái sinh cụm chồi với công thức thư trên. Để tăng số chồi ta tiến hành thêm bước nữa là nhân cụm chồi.
4. Nhân cụm chồi
Sau 3 – 4 tuần mẫu cấy tạo cụm phôi, sau 5 – 6 tuần cụm phôi phát triển thành cụm chồi. Mỗi chồi dược tách riêng và cắt một đoạn khoảng 1cm cấy vào môi trường nhân cụm chồi như sau: MS +2mg/l BA +0,1 mg/l NAA + 20% Nước dừa + 30g/l sucrose + 0,9 % agar Hạ Long), cấy chuyền sau 4 – 5 tuần/lần. Số lần cấy chuyền không vượt quá 6 lần. Sau nhiều lần cấy truyền khi số lượng chồi đạt yêu cầu ta tiến hành chuyển qua giai đoạn tái sinh cây con.
5. Tái sinh cây in-vitro
Mỗi chồi được tách riêng và cắt một đoạn khoảng 1cm và cấy vào môi trường tái sinh cây hoàn chỉnh. Môi trường tái sinh: MS 0,1 mg/l NAA (1/2 Ms không bổ sung chất kích thích sinh trưởng) + 20g/l sucrose + than hoạt tính 0,1 – 0,15%. Sau 30 ngày nuôi cấy chồi con có rễ, thân, lá phát triển tốt chuẩn bị đưa ra luống ươm.